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技術(shù)文章

NIGHTSEA產(chǎn)品應(yīng)用二:預(yù)篩選樣本,輔助解剖

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美國(guó)nightsea致力于研究和開(kāi)發(fā)熒光觀測(cè)裝備,其產(chǎn)品系列有DFP-1雙熒光蛋白手電筒系列BLS2單熒光蛋白手電筒系列SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器

熒光是各種各樣細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)系統(tǒng)學(xué)及其他領(lǐng)域研究中的一種強(qiáng)大和廣泛使用的工具。
nightsea的DFP-1,BLS2和SFA-RB除了可用于篩選轉(zhuǎn)基因生物外,還可以用于樣本的預(yù)篩選、輔助解剖、用于珊瑚研究等,下面就列舉一些實(shí)例:

 

1. 有時(shí)候,研究者們需要對(duì)小鼠的伏隔核進(jìn)行穿孔,以便進(jìn)一步生化分析。如果能觀測(cè)到共轉(zhuǎn)染的熒光,就能很容易找到正確的穿孔部位。研究者們就是用BLS2 Bluestar手電筒,來(lái)觀測(cè)熒光,從而找到正確穿孔位置的(文獻(xiàn)– Xuan Li and Marina E. Wolf, 2011. Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis. J. of Neuroscience Methods, Vol. 201, Issue 1, pp. 177-179. LINK)

EGFP標(biāo)記的慢病毒質(zhì)粒注射進(jìn)小鼠大腦區(qū)域( Marina Wolf, Rosalind Franklin University

 

2.研究者從小鼠大腦中提取GFP標(biāo)記的背紋體。他們把這比喻成:從一個(gè)大一點(diǎn)的燕麥片中分離出一塊小的燕麥片,這是很困難的。但是他們用NIGHTSEA的DFP-1或BLS2(手電筒和眼鏡組合),他們很容易看到大腦中的目標(biāo)區(qū)域,從而讓解剖更準(zhǔn)確。

小鼠大腦中GFP標(biāo)記的背紋體(Charles Mazel. Sample photographed at laboratory of Stefano Vicini, Georgetown University

 

3.DFP-1雙熒光蛋白手電筒,BLS2單熒光蛋白手電筒,或SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器,可以很快的檢測(cè)樣本是否染色(Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記)成功,如下圖:

兔腰肌的肌纖維(用Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記)

左圖:白光觀測(cè)  右圖:Royal Blue熒光觀測(cè)(Motic SMZ-186體視顯微鏡觀測(cè))

 

4.SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器以斑馬魚(yú)為模型,觀測(cè)不同毒劑(醫(yī)藥、農(nóng)藥、食品添加劑等)改變大腦的發(fā)育。觀測(cè)圖片如下:

基因斑馬魚(yú)大腦共聚焦圖像
Kaede protein– 綠色是未改變的,紅色是改變了的
Robert Thorn(Creton Lab, 布朗大學(xué))提供

 

5. 熒光是珊瑚采集研究的重要工具。現(xiàn)在,可以用經(jīng)濟(jì)又實(shí)惠的SFA-RB體視顯微鏡熒光適配器安裝到體視顯微鏡檢測(cè)珊瑚。
下面的圖片是通過(guò)立體顯微鏡觀看珊瑚蟲(chóng)。這是由Alina Szmant 博士(UNCW威爾明頓納大學(xué))與NIGHTSEA的Charles Mazel共同觀測(cè)的結(jié)果

 

6.用于結(jié)核分枝桿菌重組株的篩選

在結(jié)核分枝桿菌中成功構(gòu)建了同源重組系統(tǒng),利用該系統(tǒng)構(gòu)建了rv1364c、pstP跨膜區(qū)、pstP胞外區(qū)三個(gè)突變株,得到雙交換突變株的效率為25% -62.5%,從雙交換突變株得到無(wú)痕缺失突變株的效率為100%.通過(guò)gfp作為熒光標(biāo)記基因,利用NightSea BlueStar藍(lán)光手電筒和濾光眼鏡,可以對(duì)平板上的基因缺失株直接進(jìn)行快速判定.
本研究采用nightsea BLS2 BlueStar 藍(lán)色手電筒和濾光鏡對(duì)平板上的結(jié)核分枝桿菌綠色熒光蛋白菌落進(jìn)行快速鑒定。該方法可以從幾百個(gè)菌落中瞬間鎖定陽(yáng)性克隆。平板上的菌落照片拍攝用單反相機(jī)加載濾光片(購(gòu)自nightsea公司)實(shí)現(xiàn)。

摘自文章[結(jié)核分枝桿菌同源重組基因敲除系統(tǒng)的構(gòu)建和應(yīng)用]

 

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