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技術文章

體視顯微鏡熒光適配器的激發/發射濾光片配置技巧

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  體視顯微鏡(Stereo Microscope)常用于解剖、篩選和活體觀察,通過加裝體視顯微鏡熒光適配器,可實現對GFP、RFP等熒光標記樣本的快速成像。然而,熒光信號弱、背景噪聲高、串色等問題常源于濾光片配置不當。合理選擇與搭配激發(Excitation)、發射(Emission)濾光片及二向色鏡(Dichroic Mirror),是獲得高質量熒光圖像的關鍵。
 
  一、理解濾光片系統組成
 
  典型的熒光適配器包含三部分:
 
  激發濾光片:只允許特定波長的激發光通過(如470/40 nm用于GFP);
 
  二向色鏡:反射激發光至樣品,透射發射光至目鏡/相機;
 
  發射濾光片:阻擋殘余激發光,僅透過樣品發出的熒光(如525/50 nm)。
 
  二、配置技巧與注意事項
 
  避免串色:多色熒光觀察時,確保各通道激發/發射光譜無重疊。例如,GFP與RFP組合較安全,而YFP與RFP易串色,需選用窄帶濾光片。
 
  優先選擇帶通(Bandpass)濾光片:相比長通(Longpass),帶通能更有效抑制背景噪聲,提升信噪比。
 
  匹配光源波長:LED熒光光源需覆蓋所選激發波段。若使用汞燈,注意其強度在紫外區較強,適合DAPI。
 
  驗證實際效果:安裝后先用陽性對照樣本測試,調整曝光時間和增益,避免過曝或信號不足。
 
  注意適配器兼容性:不同品牌體視鏡(如Leica MZ10、Nikon SMZ25)接口尺寸不同,需確認濾光片模塊是否匹配。
 
  進階建議:對于弱熒光樣本,可搭配高靈敏度sCMOS相機,并關閉室內照明以減少雜散光干擾。
 
  正確配置濾光片系統,能讓普通體視顯微鏡煥發“熒光之眼”,在發育生物學、轉基因篩選、神經科學等領域發揮強大作用。
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